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酵母表面展示技術平臺
酵母表面展示（Yeast surface display，YSD）是一種強大的蛋白質工程技術,是目前蛋白工程中重要的高通量篩選平臺。酵母細胞具有真核細胞翻譯后修飾機制，能夠幫助目的蛋白正確折疊，可以用來展示各種真核蛋白，包括抗體、受體、酶和抗原肽等。
阿帕克生物具有經驗豐富的專業團隊和先進技術平臺，結合流式細胞分選提供基于酵母表面展示技術的蛋白質工程服務，用于改善蛋白質性質，包括親和力、特異性、酶功能和穩定性等，歡迎咨詢與合作交流！
技術原理
NBbiolab酵母表面展示平臺采用“α-凝集素”展示系統，將納米抗體基因序列和表達標簽HA tag基因序列插入至蛋白質支架-Aga2基因的展示質粒載體中，該載體使用營養標記物在酵母中維持選擇性生長，并通過培養基中加入半乳糖誘導酵母進行表面展示，納米抗體融合蛋白被分泌并錨定在酵母細胞壁上。再結合磁珠及流式分選技術進行多輪篩選，可篩選得到高親和力、高穩定性的克隆。
圖 阿帕克生物基于a-凝集素的 Saccharomyces cerevisiae 酵母表面展示系統示意圖
酵母表面展示技術優勢
NBbiolab HITSmart納米抗體發現服務
阿帕克生物將酵母表面展示、細胞流式分選與NGS結合使用，解放常規文庫篩選的局限，實驗效率翻倍，一次實驗可獲得超越傳統篩選方式的百倍優質克隆！已為多家企業成功篩選到高親和力抗體（靶點有HSA等）阻斷抗體（靶點有PD-L1、PD-1、CTLA-4、LAG3、TIGIT等），特異性抗體（靶點有CD16a,FcRL5等）和TCR mimic 抗體。
NBbiolab HITSmart納米抗體服務流程
NBbiolab HITSmart納米抗體服務優勢
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酵母表面展示VS噬菌體展示（點擊篇名跳轉閱讀）
【摘要】酵母表面展示與噬菌體展示相比，具有顯著優勢。酵母具有類似于高等真核生物的分泌途徑，使蛋白質能夠正確地折疊和分泌。與噬菌體表面展示不同的是，使用FACS可以基于親和力和展示水平篩選庫，對于在酵母表面展示中的高親和力的選擇不受表達水平的負面影響，這消除了表達偏向可能引起的任何潛在偏差。此外，酵母表面展示可實時區分僅在抗體親和力上略有不同的克隆。通過兩色染色，可以直接在酵母細胞表面確定抗體親和力，避免了亞克隆、表達和純化的需要。這種技術使得在一種展示格式中，可以快速篩選和優化目標抗體的親和力、穩定性和細胞外表達。
酵母展示技術用于提高蛋白質的親和力（點擊篇名跳轉閱讀）
【摘要】酵母展示技術可以區分親和力只有2倍差異的蛋白質，具有較高的敏感性，已經成為蛋白質親和力成熟的重要工具。如圖 4 所示，一般通過隨機突變創建大小為107 ?109 的蛋白質突變文庫，經電轉化和同源重組，這些突變體與 Aga2p 融合展示在酵母表面；通過與熒光標記配體一起孵育，用FACS分選高親和力突變體，每一輪分選的細胞可以擴增培養參與再次分選，從而降低文庫多樣性，最終獲得少量的高親和力酵母細胞克隆；也可以提取所選酵母細胞 DNA，進行新一輪隨機突變，構建新的展示文庫，參與新一輪分選，直到篩選出所需親和力的蛋白質。
酵母展示技術用于TCR工程化改造（點擊篇名跳轉閱讀）
【摘要】體內天然的TCRs雖然表現出與抗體相似的遺傳和序列多樣性，但TCRs的結合親和力比抗體要低幾個數量級。盡管TCR親和力與T細胞活性之間的相關性存在一些分歧，但選擇高親和力TCR或通過定向進化微調TCR的親和力都是改善TCR-T抗腫瘤反應的技術手段。通過酵母表面展示技術對TCR的重鏈和輕鏈可變區的互補決定區進行隨機突變得到酵母展示文庫，經過多輪篩選，定向進化后的TCR可實現皮摩爾范圍內的親和力。與噬菌體展示方法相比，使用酵母表面展示TCR定向進化的一個主要優點是它能夠直接評估在酵母細胞上表達的TCR或突變體的結合親和力，而不需要經過大量的蛋白質表達和純化步驟。
酵母表面展示技術用于酶的定向進化（點擊篇名跳轉閱讀）
【摘要】酶蛋白有廣泛的應用價值，參與各種化學反應，包括分解、合成和能量轉化等。
通過定向進化，人們可以調整酶蛋白的結構和活性，使其更具高效性和特異性。使用酵母展示技術已成功實現了酶的人工定向進化。多種酶已成功展示在酵母細胞表面。米黑根毛霉脂肪酶(RML)是一種生物催化劑，通過定點突變并展示在酵母細胞表面，得到的突變體顯示出比原始酶活性更高的酯化活性，可應用于食品工業、精細化工和生物柴油生產。 抗壞血酸過氧化物酶(APEX)是一種工程過氧化物酶，通過酵母展示系統進行定向進化，創造了進化的分裂APEX2系統，具有較高的過氧化物酶活性，可應用于新領域的生物學研究。使用酵母展示系統展示的β-葡萄糖苷酶，可以增加飲料的香氣和風味。